猪尿中盐酸克仑特罗残留检测方法




1.安全要求

在实验过程中应穿着工作服,口罩和手套;提取和净化操作应在通风橱中进行,以避免溶剂气体吸入和皮肤接触;将废弃的化学试剂收集在专用容器中进行集中处理。

2,急救措施

在皮肤暴露于有机溶剂或酸或碱溶液后,用水洗涤,并将有机溶剂或酸或碱溶液溅入眼睛中并用水冲洗。

3.适用范围

该标准程序适用于检测猪肝中的克伦特罗残留。

4.职责

检查员必须按照标准操作程序进行检查,质量监督员负责监督标准操作程序的正确执行。

5,检测原理

将残留的盐酸克伦特罗提取,纯化,洗脱,并通过气相色谱 - 质谱法衍生化二甲基甲硅烷基三氟乙酰胺(BSTFA),并通过外标法定量。

6,方法灵敏度

猪肝中克伦特罗的定量限为0.5μg/kg。

7,注意事项

7.1柱清洗过程中的加载,冲洗和洗脱流速保持在1~2mL/min

7.2在衍生化过程中,保持干燥。

8.材料,仪器和试剂的准备和基本要求

除非另有说明,以下试剂均为分析纯;水是符合GB/T6682的一级水。

8.1参考材料,试剂,材料和标准储备溶液,标准工作流体的制备

8.1.1盐酸克伦特罗含有不低于98.5%的克伦特罗。

8.1.2盐酸

8.1.3乙酸乙酯

8.1.4无水甲醇

8.1 5氨

8.1.6异丙醇

8.1.7乙酸

8.1.8醋酸铵

8.1.9在0.03 mol/L盐酸溶液中加入2.7 mL盐酸溶液,用水稀释至1000 mL。

8.1.10 4%氨化甲醇溶液取4.0 mL氨水,用甲醇稀释至100 mL。

8.1.11 SCX固相萃取柱Supelclean 500mg,3mL。

8.1.12 C18固相萃取柱Supelclean 500mg,3mL。

8.1.13 0.02mol/L乙酸铵缓冲液(pH 5.2)将1.45g乙酸铵溶于800mL水中,用乙酸调至pH5.2,用水稀释至1000mL。8.1.14乙酸乙酯 - 异丙醇混合物(60: 40)取600 mL乙酸乙酯,加入400 mL异丙醇,充分混合。

8.1.15双三甲基甲硅烷基三氟乙酰胺(BSTFA)Aldrich,德国

8.1.16标准储备溶液(1mg/mL)的制备在25mg至25mL容量瓶中准确称量盐酸克伦特罗标准品,将其溶于无水甲醇中并稀释至刻度。存放在-20C冰箱中,有效期为1年。

8.1.17标准工作溶液A(10μg/mL)的制备将0.5 mL储备溶液置于50 mL容量瓶中,用无水甲醇稀释至刻度。储存在4°C的冰箱中3个月。

8.1.18标准工作液B(100μg/L)的制备取工作液0.5mL至50mL容量瓶,用无水甲醇稀释至刻度。存放在4°C的冰箱中,有效期为1个月。

8.1.19对照溶液的制备取5μL工作液B,25μL,50μL,100μL,500μL和1000μL,按9.3.6~9.4.2操作,得到1μg/L ,5μg/L,10μg/L,20μg/L,100μg/L,200μg/L 6浓度的对照溶液,使用前配制。

8.2仪器和设备

8.2.1 GC-MS Agilent 6890-5973,EI源

8.2.2分析天平精度0.000 01g,梅特勒AE240

8.2.3分析天平精度0.01g

8.2.4用离心管50mL

8.2.5带螺帽玻璃的玻璃管5.0mL

8.2.6均质机NISSEI AM-6

8.2.7离心机Himac CF16RX型

8.2.8涡旋混合器IKA MS2型

8.2.9酸度计梅特勒托莱多320

8.2.10真空泵Millipore WP61220508.2.11固相萃取装置ALLTECH 24孔

8.2.12干燥箱ESPEC LC-213型温度范围40~250%,精度±10C

8.2.13样品浓缩器PIERCE IL61105

9,检查步骤

9.1样品的制备

9.1.1混合后取出试样并用作试验材料。

9.1.2混合后取空白样品作为空白样品(阴性对照)。

9.1.3取空白样品(5±0.05)g,加入100μg/L盐酸克伦特罗标准溶液B100μL,并加入样品作为空白(阳性对照)。

9.2提取

9.2.1在聚丙烯离心管中精确测量5 mL测试材料,用乙酸调节pH至5.2。

9.2.2加入1.0ml 0.02mol/L乙酸铵缓冲液并混匀。

9.2.3加入10.0ml乙酸乙酯 - 异丙醇混合物(60×10177b40),涡旋2分钟,静置直至上清液澄清,收集上清液。用乙酸乙酯和异丙醇(60; 40)的混合物重复萃取一次,并将两种萃取物合并在带塞的玻璃试管中。

9.2.4萃取液用氮气在50-60℃的水浴中干燥。

9.2.5取0.02mol/L乙酸铵缓冲液2.0mI。将残余物溶解作为储备。

9.3净化

9.3.1使用Sep Pek真空接头以自上而下的顺序连接C18和SCX固相萃取柱,并置于固相萃取单元上。

9.3.2用5.0 mL无水甲醇,5.0 mL水和5.0 mL 0.03 mol/L盐酸溶液活化萃取柱。

9.3.3将原液通过色谱柱,用1 mL 0.02 mol/L醋酸铵缓冲液清洗玻璃管。清洁溶液通过柱子。

9.3.4依次用5.0 mL水和5.0 mL无水甲醇冲洗萃取柱;真空干燥并丢弃C18柱。

9.3.5在5.0 mI下用4%氨化甲醇溶液洗脱,流速不得超过0.5 mL/min,并将洗脱液收集在另一个带塞的玻璃试管中。9.3.6将洗脱液用氮气在50-60℃的水浴中吹干。

9.4衍生化

9.4.1取100μL甲苯溶解残留物。

9.4.2添加:BSTlFA100μL,加盖,并在涡旋混合器上混合。

9.4.3在80°C的干燥箱中加热1小时。冷却后,加入0.3mL甲苯,混合并转移至样品瓶中。

9.5测定

9.5.1气相色谱条件

9.5.1.1柱:HP-5MS 5%苯基甲基聚硅氧烷,30m×0.25mm(内径),0.25μm(膜厚)。

9.5.1.2入口:220%:

9.5.1.3注射方法:不分裂。

9.5.1.4进样体积:1μL。

9.5.1.5柱温:70℃(保持0.6分钟),以250℃/分钟升温至220℃(6分钟),并升温至250℃/280℃(5分钟)。

9.5.1.6载气:氦气,流速0.9mI/min(恒定电流)。

9.5.2质谱条件

9.5.2.1 EI源。

9.5.2.2 GC/MS传输线温度:280°C。

9.5.2.3溶剂延迟:8分钟。

9.5.2.4 EM电压:高于调谐电压200V。

9.5.2.5分析仪温度:230°C。

9.5.2.6四极杆温度:150°C。

9.5.2.7选择离子监测:(M/Z)86,243,262,277。

9.5.2.8定量离子:86。

9.6测定方法

9.6。 1依次从低浓度到高浓度确定一系列对照溶液,将得到的峰面积与相应的对照溶液浓度作为标准曲线进行比较,计算回归方程和相关系数。

9.6.2取样品溶液和相应的对照溶液(20μg/L)进行单点校准,按峰值面积按外标法计算。对照溶液和样品溶液中盐酸克伦特罗的反应应在仪器的线性范围内。

9.6.3空白试验

使用完全相同的测量程序进行平行操作,除了没有添加样品。9.7记录和计算

9.7.1录音

9.7.1.1逐项填写中国兽药检验所“检验记录”主页。

9.7.1.2参考名称,来源,批号,内容。

9.7.1.3储备溶液,工作液和对照溶液的制备和制备日期。

9.7.1.4样品的制备,提取,纯化和测定(包括测量过程中涉及的测量仪器的数量)。

9.7.1.5原始数据(包括仪器映射和打印数据)。

9.7.1.6计算公式和计算过程(软件计算除外)。

9.7.2计算

计算测试材料中克伦特罗的残留量如下:

在公式:

X——样品中克伦特罗的含量(μg/kg);

CS——标准溶液中的盐酸克伦特罗(μg/L);

在测试溶液中,Ai——衍生化盐酸克仑特罗区域;

衍生化的盐酸克伦特罗区域在AS——标准溶液中;

V1——样品液体终体积(mL);

V2——使用的样品量(mL)。

(注:计算结果从空白值中扣除,测量结果用并行测量的算术平均值表示,保留3个有效数字)

9.8结果确定

9.8.1线性范围线性范围在1到200μg/L范围内进行了研究,回归方程计算的相关系数≥0.99。

9.8.2准确度该方法在0.5至2μg/kg添加浓度范围内的回收率为60%至120%。

9.8.3精密度该方法的测定内变异系数≤30%,批次之间的变异系数≤30%。

9.8.4匹配度样品峰保留时间与标准峰之间的差值不得超过2 s,特定结构离子和标准品的相对丰度应在±15%以内。

如果方法学调查满足上述要求,则确定测试材料中药物的残留量何时为X0.5μg/L.

10附加说明

10.1本标准的操作程序以农业部第1025号公告为基础。10.2盐酸克伦特罗最大残留量:

参考:兽药残留检测的标准实施规程

关键词:盐酸克伦特罗,气相色谱,质谱,AOC官方网站,北京世纪奥克

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下一步:判断商品煤反射率分布图的方法









时间:2019-02-10 08:30:28 来源:凤凰彩票网 作者:匿名